न्यूक्लिक अॅसिड संश्लेषणाची तत्त्वे

न्यूक्लिक अॅसिडचे संश्लेषण सॉलिड फेज सियालिक अमाइड ट्रायग्लिसराइड पद्धतीने केले जाते, ज्याद्वारे डीएनएचा 3′ टोक घन फेज सब्सट्रेटवर स्थिर केला जातो आणि इच्छित DNA तुकडा संश्लेषित होईपर्यंत 3′ ते 5′ दिशेने न्यूक्लियोटाइड जोडले जातात. .हे डीएनए पॉलिमरेझच्या वापराद्वारे डीएनए संश्लेषणापेक्षा वेगळे आहे.

संश्लेषणादरम्यान पहिल्या बेसचा 3′ टोक CPG वर स्थिर केला जातो, पुढील बेसचा 5′-OH di-p-tolyl trityl DMT सह संरक्षित आहे, बेसवरील अमिनो गट बेंझोइक ऍसिड आणि 3′ सह संरक्षित आहे. -ओएच नंतर एमिनो फॉस्फेट कंपाऊंडसह सक्रिय केले जाते.1 बेसच्या 5 5′-OH पैकी 1 बेस आणि पुढील बेसचा 3′-OH फॉस्फाइट ट्रायग्लिसराइड बनवतो, जो नंतर आयोडीनसह फॉस्फेट ट्रायग्लिसराइडमध्ये ऑक्सिडाइज केला जातो, दुसऱ्या बेस 5′-OH वरील संरक्षक काढून टाकला जातो. पुढील बेस जोडून डायक्लोरोएसेटिक ऍसिड डीएम चक्र जोडणे, आणि संश्लेषणानंतर 5′-OH वरील संरक्षक कमकुवत ऍसिडसह काढून टाकला जातो, तुकडा घनरूप अमोनियम हायड्रॉक्साईडसह घन राळपासून डिस्कनेक्ट केला जातो, संरक्षक बेसपासून काढून टाकला जातो. एकाग्र केलेल्या अमोनियम हायड्रॉक्साईडसह हीटिंग अंतर्गत, अमोनियम हायड्रॉक्साईड काढून टाकला जातो, तुकडा व्हॅक्यूम वाळवला जातो आणि न्यूक्लिक अॅसिड द्रव क्रोमॅटोग्राफी किंवा PAGE द्वारे शुद्ध केले जाते.

ऑलिगो संश्लेषणाचे चरण

अवरोधित करणे

दटीसीए सोल्यूशन जोडून 5 एंड डीएमटी संरक्षण गट काढला जातो.

सक्रियकरण

सक्रिय ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड मोनोमर इंटरमीडिएट तयार करण्यासाठी ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड मोनोमरसह एक्टिव्हेटरचे मिश्रण करणे.

कपलिंग

5-टर्मिनल हायड्रॉक्सिल गट सक्रिय ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड इंटरमीडिएट सोबत प्रतिक्रिया करून एक अस्थिर फॉस्फाइट ट्रायग्लिसराइड बाँड तयार करण्यासाठी अँटी-जनरेटिव्ह कंडेन्सेशन प्रतिक्रिया देतो.

कॅपिंग 

कॅपिंग एजंट जोडल्याने अतिरिक्त हायड्रॉक्सिल गटांसह एसिटिलेशन कॅपिंग प्रतिक्रिया होते जी संक्षेपण प्रतिक्रियेमध्ये सामील नाहीत.

ऑक्सिडेशन 

पाणी असलेले आयोडीन द्रावण ऑक्सिडेशनद्वारे अस्थिर फॉस्फाइट बंधांवर प्रतिक्रिया देऊन स्थिर फॉस्फोरिक ऍसिड ट्रायग्लिसराइड बंध तयार करतात.

सायनोइथिल क्लीवेज

फॉस्फेट ट्रायग्लिसराइड बाँडमधून सायनोइथिल गट काढून टाकण्यासाठी डीईए सोल्यूशनसह संश्लेषणानंतर न्यूक्लिक अॅसिड उत्पादन.

क्लीव्ह आणि डिप्रोटेक्शन

न्यूक्लिक अॅसिडचे तुकडे एकाग्र अमोनियम हायड्रॉक्साईड द्रावण जोडून सॉलिड फेज कॅरिअरमधून क्लीव्ह केले जातात आणि नंतर बेसच्या हायड्रोजन बंधांपासून संरक्षण गट काढून टाकण्यासाठी गरम केले जातात.